上海一研生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學(xué)試劑盒
貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒
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上海市閔行區(qū)
主營產(chǎn)品
準(zhǔn)備物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒 | Chlamydophila felisPCR | 50T |
普通PCR反應(yīng)流程:
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
反應(yīng)五要素:
貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
使用方法 :
1 實驗所需器材與試劑
1.1 器材
1)PCR儀
2)PCR反應(yīng)管
3)電泳儀及水平電泳槽
4)高速離心機(jī)
5)微量移液器及移液器吸頭
1.2 試劑
1)瓊脂糖
2)EB(溴化乙錠)
3)去離子水或雙蒸水
注意事項:
5.1使用本試劑前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。
5.2 操作時應(yīng)盡量少說話,因口腔中也含有支原體,可能引起樣品污染,而造成假陽性;整個檢測過程中,反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行,以避免交叉污染。 5.3 實驗時,試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻(混勻時禁止激烈振蕩,只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻)。
5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后,應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增,以免形成過多的二聚體。
5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測靈敏度,建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。
穿心蓮內(nèi)酯Lycorine
穿心蓮乙素Cyanidin-3-O-glucoside chloride
次百部堿strychnine
刺五加苷B 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: L-Rhamnose monohydrate
刺五加苷DCarnosol
刺五加皂苷B Carnosic acid
大豆皂苷AA 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Progenin III
大豆皂苷BB 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Dioscin
大薊苷Diosgenin
大葉茜草素Dihydroartemisinin
丹參酚酸A 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Bisdemethoxycurcumin
丹參酮Ⅰ 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Isocarbophos
丹參酮ⅡA 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Silymarin
丹酚酸C 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: Silydianin
靛玉紅Silychristin
丁香酚Oxypeucedanin hydrate
貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒人蛋白激酶A(PKA)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Crocin II 1mg
人蛋白二硫化物異構(gòu)酶前體(PDI)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Daphnoretin 1mg
人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)orientalinA 1mg
人蛋白Z(Protein Z)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)siegesmethyethericacid 1mg
人蛋白S(Protein S)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Siegesbeckicacid 1mg
人蛋白C(Protein C)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)orientalinB 5mg
人蛋白(nephrin)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Darutoside 5mg
人彈性蛋白酶(Elastase)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) Darutigenol 10mg