操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。產(chǎn)品僅供科研使用
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

人體膠質(zhì)瘤組織提取物【Cancer: Human Glioma Derivatives】
產(chǎn)品描述：膠質(zhì)瘤是發(fā)生于神經(jīng)外胚層的腫瘤，故亦稱神經(jīng)外胚層腫瘤或神經(jīng)上皮腫瘤。腫瘤起源于神經(jīng)間質(zhì)細胞，即神經(jīng)膠質(zhì)、室管膜、脈絡(luò)叢上皮和神經(jīng)實質(zhì)細胞，即神經(jīng)元。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體膠質(zhì)瘤組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：產(chǎn)品僅供科研使用
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit 96T/48T 尼可地爾N-氧化物  Nicorandil N-Oxide 

大鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA檢測試劑盒Ratosteonectin,ONELISAKit 96T/48T 尼可地爾-d4  Nicorandil-d4 

RatHaptoglobin,Hpt/HPELISAKit大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 莫索尼定  Moxonidine   質(zhì)量規(guī)格：度>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

BCA蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒100/500 莫索尼定(標準品)  Moxonidine   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

MouseInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 奈帕芬胺  Nepafenac  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 3(Eotaxin 3)ELISA試劑盒 ，英文名： Eotaxin 3 ELISA Kit 奈帕芬胺(標準品)  Nepafenac  質(zhì)量規(guī)格：>99%,標準品

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA檢測試劑盒Mouseansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 96T/48T 尼卡巴嗪   Nicarbazin   質(zhì)量規(guī)格：>98%

人高密度脂蛋白膽(HDL-C)試劑盒 Human High density lipoprotein cholesterol,HDL-C ELISA Kit 鹽酸尼莫司汀  Nimustine HCl(ACNU)  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

RatHeatShockFactor1,HSF1ELISAKit大鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T BEZ235 (Dactolisib)  NVP-BEZ 235  質(zhì)量規(guī)格：>98%;ATP競爭性PI3K和mTOR抑制劑

BCA蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒100/500 吡嘧司特鉀  Pemirolast potassium  質(zhì)量規(guī)格：>98%

MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1,IGFBP-1ELISA試劑盒小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 培哚普利  Perindopril erbumine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,鹽形式
人體膠質(zhì)瘤組織提取物寡核苷酸探針非同位素AP-BCIP/NBT法DNA南方雜交完全試劑盒5 乙酸鎳四水(>98%,BC)  Nickel (II) acetate, tetrahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

寡核苷酸探針非同位素AP-BCIP/NBT法RNA北方雜交完全試劑盒5 尼羅紅(>95%,BS)  Nile red  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BS

寡核苷酸探針非同位素AP化學(xué)發(fā)光法DNA斑點雜交完全試劑盒5 N-苯基脲(>97%,BR)  N-Phenylurea  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

寡核苷酸探針非同位素AP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交完全試劑盒5 軟海綿酸(>95.0%,BC)  Okadaic acid, free acid  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%,BC

寡核苷酸探針非同位素AP化學(xué)發(fā)光法RNA北方雜交完全試劑盒5 軟海綿酸鈉(>95.0%,BC)  Okadaic acid,  salt  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%,BC

寡核苷酸探針非同位素HRP-DAB顯色法DNA斑點雜交完全試劑盒5 結(jié)晶碳酸鉀(>98%,BR)  Potassium carbonate, hydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

寡核苷酸探針非同位素HRP-DAB顯色法DNA南方雜交完全試劑盒5 焦鉀(>97%,BC)  Potassium pyrophosphate, tetrabasic  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BC

寡核苷酸探針非同位素HRP-DAB顯色法RNA北方雜交完全試劑盒5 鎢酸鉀二水(>98%,BR)  Potassium tungstate, dehydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

寡核苷酸探針非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA斑點雜交完全試劑盒5 硫酸奎寧水合物(>98%,BR)  Quinine hemisulfate salt hydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

寡核苷酸探針非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交完全試劑盒5 氫二鈉十二水(>98%,BR)   phosphate, dibasic, dodecahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
注意事項：
1. 接收到人體膠質(zhì)瘤組織提取物，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。