人體視網(wǎng)膜組織提取物【Eye: Normal Human Retinal Derivatives】
產(chǎn)品描述：視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體視網(wǎng)膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到人體視網(wǎng)膜組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)試劑盒 Rat annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit 米托蒽醌  Mitoxantrone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,BR

大鼠膜聯(lián)蛋白I(ANX-I)試劑盒 Rat annexin I,ANX-I ELISA Kit 米吐爾(>98%,BC)  Metol  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

大鼠膜聯(lián)蛋白IV(ANX-IV)試劑盒 Rat annexin IV,ANX-IV ELISA Kit 米替福新(標(biāo)準(zhǔn)品)  Miltefosine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠膜相關(guān)0脂酶A2(PLA2G2A)試劑盒 Rat Phospholipase A2, membrane associated,PLA2G2A ELISA kit 米替福新  Miltefosine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)試劑盒 Rat terminal compleme complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit 米屈肼(標(biāo)準(zhǔn)品)  Mildronate,Meldonium  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISA檢測試劑盒RatterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 96T/48T 米屈肼  Mildronate,Meldonium  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,二水合物

人甘油二酯(DAG)試劑盒 Human diacylglycerol,DAG ELISA kit N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)  N-Acetyl-cysteine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

RatImmunoglobulinG,IgGELISAKit大鼠球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 佐匹克隆    質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BP2009,BR

BrdU標(biāo)記法細(xì)胞繁殖比色法定量檢測試劑盒10/50 佐匹克隆(標(biāo)準(zhǔn)品)    質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

MouseIerleukin-2receptor,IL-2RELISA試劑盒小鼠白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 阿尼西坦，回拉西坦;茴拉西坦  Aniracetam  質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR

小鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA試劑盒 ，英文名： NF ELISA Kit 阿尼西坦(標(biāo)準(zhǔn)品)  Aniracetam  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA檢測試劑盒Mouseangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 96T/48T L-谷氨酰胺  L-Glutamine  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
人體視網(wǎng)膜組織提取物人β2轉(zhuǎn)鐵蛋白(β2TF)試劑盒 Human beta 2 ansferrin,β2TF ELISA Kit 滅菌丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)  N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2%

人β4整合素(ITG β4/CD104)試劑盒 Human ITG β4/CD104 ELISA Kit 滅菌丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)  N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%

人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)試劑盒 Human β-hexosaminidase A,β-Hex A ELISA Kit 惡草酮(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%)  Oxadiazon  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%

人β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidaseA)ELISA檢測試劑盒Humanβ-hexosaminidaseA 96T/48T 甲基嘧啶磷(10μg/ml,u=3%)  Pirimiphos-methyl solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=3%

人β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA檢測試劑盒Humanβ-galactosidase,βGAL 96T/48T 撲滅津(標(biāo)準(zhǔn)品)  Propazine  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人β半乳糖苷酶(βGAL)試劑盒 Human β-galactosidase,βGAL ELISA Kit 戊炔草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Propyzamide  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人β-促脂素(β-LPH)ELISA檢測試劑盒Humanβ-lipoopichormone,β-LPH 96T/48T 腐霉利(標(biāo)準(zhǔn)品)  Procymidon  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)試劑盒 Human amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA Kit 吡蚜酮(標(biāo)準(zhǔn)品)  Pymetrozin  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)試劑盒 Human amyloid beta peptide 1-42,Aβ1-42 ELISA Kit 96T 敵稗(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)  Propanil  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%

人β淀粉樣蛋白25-35(Aβ25-35)試劑盒 Human amyloid beta peptide 25-35,Aβ25-35 ELISA Kit 抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)  Imazalil solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2%
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗。