大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞提取物【Rat Eye：Normal Trabecular Meshwork Cells Derivatives】
產(chǎn)品描述：大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞提取物是從大鼠原代小梁網(wǎng)細(xì)胞提取的，大鼠原代小梁網(wǎng)細(xì)胞從正常大鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)試劑盒 Rat neuophil elastase,NE ELISA Kit 硫酸氫氯吡格雷 II型(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISAKit 96T/48T 硫酸氫氯吡格雷 II型  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：含量97.0%-101.5%，II型

大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)試劑盒 Rat neuophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit 硫酸羥氯喹（標(biāo)準(zhǔn)品）  Hydroxychloroquine sulfate  質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查

大鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratneuophilactivatingprotein-2,NAP-2ELISAKit 96T/48T 硫酸羥基氯喹  Hydroxychloroquine Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：>98%

大鼠中性粒細(xì)胞趨化因子(CINC)試劑盒 Rat cytokine-induced neuophil chemoatacta,CINC ELISA Kit 硫酸鉛(>99%,BC)  Lead (II) sulfate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC

大鼠周期素依賴性激酶5(CDK5)試劑盒 Rat Cyclin Depende Kinase 5,CDK5 ELISA Kit 硫酸普拉睪酮鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Dehydroepiandrosterone-3-sulfate  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

大鼠周脂素(Plin1/Peri/Plin)試劑盒 Rat Perilipin-1,Plin1/Peri/Plin ELISA kit 硫酸奈替米星(標(biāo)準(zhǔn)品)  Netilmicin Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

大鼠晝夜節(jié)律蛋白同源物2(PER2)試劑盒 Rat Period circadian protein homolog 2,PER2 ELISA kit 硫酸奈替米星  Netilmicin Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：≥595 μg/mg,BR

大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)ELISA檢測(cè)試劑盒RatmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1ⅠELISAKit 96T/48T 硫酸鈉十水(>99%,BC)   sulfate, decahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC

大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)試劑盒 Rat ansforming growth factor α,TGF-α ELISA Kit 硫酸錳一水(AR)  Manganous sulfate monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：AR,>99%
大鼠粘膠蛋白/肌腱蛋白C(TN-C)試劑盒 Rat Tenascin-C,TN-C ELISA Kit 明膠  Gelatin  質(zhì)量規(guī)格：藥用級(jí),膠強(qiáng)度 ~240 g Bloom

英文名稱HumanCTX-IELISAKit人I型膠原C端肽規(guī)格：96T/48T Bacto酵母浸粉(BD原裝)  Yeast extract  質(zhì)量規(guī)格：Bacto;BD212750

動(dòng)物組織同還原酶1E(aldo-ketoreductase1E)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 無(wú)水碳酸鈉   carbonate anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：AR,≥99.8%

ELISAKitLebtospira兔鉤端螺旋體IgG規(guī)格：48T/96T D-果糖  D-Fructose  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠葡萄糖60酸異構(gòu)酶(GPI)ELISA試劑盒 ，英文名： GPI ELISA Kit 核黃素鈉水合物  Riboflavin 5'-monophosphate  salt hydrate  質(zhì)量規(guī)格：核黃素73.0 ~79.0%

人合成酶(NOS)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T 化乙錠溶液，10 mg/ml  EB, Ethidium bromide stock solution, 10 mg/ml  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)試劑盒 Rat mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA kit 核苷酸膠體染料  Green-DNA Dye,SYBR Green I  質(zhì)量規(guī)格：BR

英文名稱Humangp130solublefragmeELISAKIT人gp130規(guī)格：96T/48T D-葡萄糖無(wú)水  D-Glucose  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,分子生物學(xué)級(jí)

動(dòng)物組織石蠟切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIANBLUE)染色試劑盒50 咪唑  Imidazole  質(zhì)量規(guī)格：AR

ELISAKitCA兔兒茶酚胺規(guī)格：48T/96T L(+)-阿拉伯糖  L(+)-Arabinose  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞提取物Lipase人脂肪酶規(guī)格：48T/96T 硫酸軟骨素 HPLC≥98% 20mg

LMP-1人潛伏膜蛋白1規(guī)格：48T/96T 硫酸小檗堿 HPLC≥98% 20mg

LPL人脂蛋白脂酶規(guī)格：48T/96T 硫辛酸 HPLC≥98% 20mg

Lp-PL-A2人脂蛋脂酶A2規(guī)格：48T/96T 柳穿魚(yú)黃素 HPLC≥98% 20mg

LPS人脂多糖/內(nèi)規(guī)格：48T/96T 龍膽苦苷 HPLC≥98% 20mg

Lp-α人脂蛋白α規(guī)格：48T/96T 龍膽山酮酚 HPLC≥98% 10mg

LTA人脂0壁酸規(guī)格：48T/96T 龍膽酸 HPLC≥98% 20mg

LTBP2人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2規(guī)格：48T/96T 龍血素A HPLC≥98% 20mg

LXA4人脂氧素A4規(guī)格：48T/96T 龍血素B HPLC≥98% 20mg

MAP-2人微管相關(guān)蛋白2規(guī)格：48T/96T 龍血素C HPLC≥98% 20mg
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。