PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔白介素-8(rabbit IL-8)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Benzyloxyindole  20289-26-3  中文名：4-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO 

兔白介素-6(rabbit IL-6)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Benzyloxyindole  20289-26-3  中文名：4-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%   

兔白介素6(IL-6)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  3479-47-8  中文名：N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式：C19H19NO6  度：98.0%   

兔白介素-2(rabbit IL-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     4-Benzyl L-aspartate  中文名：L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式：C11H13NO4 

兔白介素-1β(rabbit IL-1β)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  7536-58-5  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式：C16H21NO6

Aloe-emodin  中文名：蘆薈大黃素  分子式：C15H10O5  度：98.0%  猴載脂蛋白B100elisa試劑盒   猴載脂蛋白B100試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   猴載脂蛋白B100試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：猴載脂蛋白B100試劑盒、猴載脂蛋白B100elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

其它醌類        猴載脂蛋白A1elisa試劑盒   猴載脂蛋白A1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   猴載脂蛋白A1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：猴載脂蛋白A1試劑盒、猴載脂蛋白A1elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

3,4-Didehydrosapriparaquione  中文名：  分子式：C20H24O3  度：95.0%  猴胰島素elisa試劑盒   猴胰島素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   猴胰島素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：猴胰島素試劑盒、猴胰島素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Royleanone  中文名：  分子式：C20H28O3  度：95.0%  兔子Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Salvisyrianone  中文名：  分子式：C20H24O3  度：95.0%  兔子Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Boldenone  846-48-0  中文名：寶丹酮  分子式：C19H26O2 

小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Docetaxel  中文名：多西他賽  分子式：C43H53NO14 

小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1(mouse SDF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Docetaxel  中文名：多西他賽  分子式：C43H53NO14  度：98.0%

小鼠基質(zhì)裂解素(ST2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Docosanoic acid  中文名：二十二烷酸  分子式：C22H44O2 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Docosanoic acid  112-85-6  中文名：二十二烷酸  分子式：C22H44O2  度：%  關(guān)鍵詞：

乳突類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Ergosta-7,22-dien-3-one  中文名：麥角甾-7,22-二烯-3-酮  分子式：C28H44O    豬內(nèi)皮素1(ET-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Ergosta-5,24(28)-diene-3β,7α,16β-triol  中文名：  分子式：C28H46O3    豬皮質(zhì)/上腺(CO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one  中文名：麥角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮  分子式：C28H40O    豬皮質(zhì)醇(Coisol)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

ER-878898  中文名：  分子式：C20H18F2O8S    豬腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Eplerenone  中文名：依普利酮  分子式：C24H30O6    豬-葡萄糖共載體1(SGLT1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

乳突類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。