普利萊 CCK-8細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒 貨號(hào): E1008-1000

特點(diǎn)：

1. 簡(jiǎn)單快捷、即開(kāi)即用，可進(jìn)行大規(guī)模樣品檢測(cè)。描述：Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒基于WST-8試劑，可對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性進(jìn)行快速高度靈敏的檢測(cè)。與傳統(tǒng)的MTT或其他類(lèi)似的方法相比，本試劑盒生成的 Formazan 是水溶性的，而且更加穩(wěn)定，其檢測(cè)的線性范圍更寬、靈敏度也更高。

2. 與其他方法相比，檢測(cè)線性范圍更寬，靈敏度更高。

3. 對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，可在不同時(shí)間進(jìn)行多次測(cè)定，便于尋找最佳測(cè)定時(shí)間。

規(guī)格：200次   500次

儲(chǔ)存：CCK-8試劑：2ml, 5ml，?20oC 避光保存2年，4oC 避光保存1年，反復(fù)凍融可能會(huì)增加背景值

操作步驟：

1. 使用與酶標(biāo)儀相匹配的96孔培養(yǎng)板。通常進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)時(shí)，每孔加100μl 2000個(gè)細(xì)胞，而測(cè)定細(xì)胞毒性時(shí)，每孔加100μl 5000個(gè)細(xì)胞，應(yīng)根據(jù)所用的細(xì)胞類(lèi)型、增殖速度進(jìn)行調(diào)整。注意設(shè)置2-3個(gè)重復(fù)孔，分別為接受處理的細(xì)胞組，未處理的細(xì)胞對(duì)照組和無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基的對(duì)照組。37oC培養(yǎng)細(xì)胞24-48小時(shí)，然后給予特定的藥物或物理化學(xué)因素刺激。

2. 處理結(jié)束后，向每孔每100 μl培養(yǎng)基中加入10μl CCK-8試劑（注意在加入的過(guò)程中不要產(chǎn)生氣泡，否則會(huì)影響OD值的讀?。?7 oC培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間的長(zhǎng)短依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)、數(shù)量、活力等情況而定。初次實(shí)驗(yàn)者，可以選擇幾個(gè)不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)如1h, 2h, 4h用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，以便選擇出適宜的吸光度范圍進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3. 在450nm測(cè)定OD吸光度并進(jìn)行計(jì)算。如無(wú)450nm濾光片可用430-490nm范圍內(nèi)的濾光片。注意：若樣品為渾濁的細(xì)胞懸液時(shí)，可以選用大于600nm的波長(zhǎng)，如650nm作為參比波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

4. 結(jié)果判斷：細(xì)胞增殖或毒性＝100％x (OD實(shí)驗(yàn)－OD本底) / (OD對(duì)照－OD本底)。

其中，OD實(shí)驗(yàn)是接受處理細(xì)胞組的OD值，OD對(duì)照是未處理細(xì)胞對(duì)照組的OD值，OD本底是無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基的對(duì)照組OD值。處理后細(xì)胞增殖或毒性變化表示為未處理對(duì)照的百分?jǐn)?shù)。

說(shuō)明：

1. 在進(jìn)行培養(yǎng)或檢測(cè)反應(yīng)時(shí)，為避免培養(yǎng)基蒸發(fā)體積減少，可用封口膜部分封閉培養(yǎng)板。

2. 為減少由于CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來(lái)的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑混勻后再進(jìn)行加樣。

3. 本試劑盒的檢測(cè)依賴(lài)于脫氫酶的催化反應(yīng)，因此當(dāng)檢測(cè)體系中有還原性物質(zhì)如葡萄糖、維生素C等存在時(shí)，會(huì)干擾測(cè)定。

4. 可在非96孔板進(jìn)行CCK-8測(cè)定，但需要成比例加大反應(yīng)體系。反應(yīng)后用比色杯測(cè)定OD。

5. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)之前，要確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)影響測(cè)定。

6. 加入CCK-8試劑后，培養(yǎng)時(shí)間要根據(jù)不同的細(xì)胞種類(lèi)、數(shù)量和細(xì)胞狀態(tài)來(lái)確定。通常情況下，相同的培養(yǎng)時(shí)間，懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞相比，吸光度較低，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間或者增加細(xì)胞數(shù)量。此外，白細(xì)胞可能也需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間。

7. 培養(yǎng)基中含有酚紅時(shí)，可以通過(guò)扣除培養(yǎng)基背景本底的吸光度去除酚紅的影響，而不會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生影響。

參考文獻(xiàn)：

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Sachiko Sakon, Hiroyasu Nakano et al. The EMBO Journal, 2003, 22: 3898-3909

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Mohammed A. S. Khan, Earl R. Stadtman et al. PNAS, 2004, 101: 11560-11565

普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

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