mRNA 純化試劑盒

產(chǎn)品及特點

構(gòu)建 cDNA 文庫、、蛋白質(zhì)體外翻譯和 RT-PCR 檢測稀有的 mRNA 等研究常 常需要從總 RNA 中分離 mRNA。 mRNA 只占總 RNA 的 1%左右，但由于帶 poly（A）尾巴，所以可以通過與 Oligo（dT）纖維素的親和結(jié)合而與其他 RNA（如 rRNA、tRNA 等）分離開。本產(chǎn)品就是基于此原理開發(fā)的、專門用于從總 RNA 中 提取 mRNA 的試劑盒。它具有下列特點：

1. 一站式，，即開即用，非常方便。

2. 一次可以處理約 10-15 ug 總 RNA，從中可得 0.1-0.5 ug 左右的 mRNA。

3. Oligo（dT）纖維素吸附能力強，每克可以吸附 50-80 OD 的 mRNA，相當 于 2000-3000 ug mRNA。

4. 離心法、只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱等繁瑣操作。

5. 得到的 mRNA 可以直接用于構(gòu)建 cDNA 文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和 RT-PCR。

6. 本試劑盒足夠 25 次微量 mRNA 提取實驗。 
規(guī)格及成分 成分 編號 小扁盒包裝 
結(jié)合液 LM80817a 100 mL Oligo(dT)纖維素 LM80817b 25 mg RNase-free 水 80403 10 mL 微量核酸沉淀劑 50903 10 mL 使用手冊 80817sc 1 份 運輸及保存
常溫運輸，收到貨后 Oligo(dT)纖維素最好放-20℃長期保存，有效期一年。
自備試劑 75%乙醇

使用方法 本產(chǎn)品提供 25 mg Oligo(dT)纖維素，每克 Oligo(dT)纖維素能夠結(jié)合 50-80 OD 的 mRNA。

1. 將 250uL 結(jié)合液加入到裝有 25 mg Oligo(dT)纖維素的離心管中。

2. 洗滌纖維素：取 10 uL（相當于 1mg Oligo (dT)纖維素）與 0.5 mL 結(jié)合液 混勻，室溫放置 5 分鐘。10 uL 相當于 1mg Oligo (dT)纖維素。剩余部分放 -80℃保存。1000g 離心 30 秒，小心吸棄結(jié)合液后留 Oligo (dT)纖維素沉 淀待用。

3. 將自備的總 RNA 100uL（如果體積不足 100 uL，用 RNase-free 水補足）， 65℃加熱 5 分鐘。

4. 加入等體積（100uL）的結(jié)合液，混勻后冷卻到室溫。 5. 全部轉(zhuǎn)移到裝有 Oligo(dT)纖維素的離心管中，混勻后室溫放置 5 分鐘，期 間顛倒混勻數(shù)次。

6. 4℃ 1000 g 離心 5 分鐘，小心將上清轉(zhuǎn)移到一個離心管中。此上清液是去 除了 mRNA 的總 RNA?？梢?80℃保存作為陰性對照。如果 mRNA 回收失 敗也可以再次用于純化。

7. 洗滌一次：加入 0.5 mL 結(jié)合液，混勻后 4℃ 1000g 離心 5 分鐘，小心棄上 清。

8. 重復上步的洗滌步驟 2-4 次。

9. 在加入 50 uL RNase-free 水，混勻后 4℃ 1000 g 離心 5 分鐘，小心收集 上清（mRNA）。

10. 重復上步 1 次。

11. 將各次收集的 mRNA 混合，即為 mRNA 溶液。

12. 按微量核酸沉淀劑的方法沉淀 mRNA，具體操作如下：

13. 按 2:1 的比例將微量核酸沉淀劑與 mRNA 溶液混合。注意：微量核酸沉 淀劑取用前需要搖勻。

14. 室溫 15000g 離心 10 分鐘。

15. 棄上清后加自備的 75%乙醇 1 mL，振蕩混勻。

16. 15000g 離心 5 分鐘，棄上清。

17. 再短暫離心后小心吸棄上清，沉淀即為回收的 mRNA 沉淀，可溶于 RNase-free 水中直接使用或放-80℃保存。